豬瘟正向血凝抗體檢測試劑盒

一、 試驗材料

1、 6孔110°微量血凝板。

2、 10-100微升可調微量移液器

3、 塑料咀

4、 豬瘟正向間接血凝抗原（豬瘟正向血凝診斷液），每瓶5毫升，可檢測血清25-30頭份。

5、 陽性對照血清，每瓶0.5毫升；陰性對照血清每瓶0.5毫升

6、 稀釋液每瓶50毫升

7、 待檢血清每份0.2-0.5毫升（56℃水浴滅活30分鐘）

二、 操作步驟

1、 檢測前，應將試劑盒從冰箱中拿出回溫到室溫，并且將抗原液搖勻。

2、 稀釋待檢血清：在血凝板上的第1孔――第六孔各加稀釋液50ul，待檢血清加入第1孔，混勻后從中取出50ul加入第二孔，依此類推直至第六孔混勻后丟棄50ul，從第1孔――第六孔的血清稀釋度依次為1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64。

3、 稀釋陰性血清和陽性血清：在血凝板上的*1排*孔加稀釋液50ul，取陰性血清50ul混勻后取出50ul丟棄。此孔即為陰性血清對照孔。在血凝板上的*2排*孔加稀釋液50ul，第2孔――第7孔各加稀釋液50ul 。吸取陽性血清50ul，加入*孔混勻并從中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混勻并丟棄50ul。第七孔的陽性血清稀釋度則為1：512。

4、 在血凝板上的*排第8孔加稀釋液50ul即為稀釋液對照孔。

5、 滴加抗原：*排1－8孔和對照孔各加血凝抗原25ul立即置微量震蕩器上震蕩1分鐘，或用手搖勻。室溫下靜置2-3小時后判斷結果，也可于次日判斷結果。

6、 判定方法和標準：先觀察陰性血清對照好和稀釋液對照孔，紅血球應全部沉入孔底，無凝集現(xiàn)象（－）或呈陽性（+）的輕度凝集為合格；陽性血清對照應呈(+++)凝集為合格。

在以上3孔對照合格的情況下，觀察待檢血清各孔的凝集程度，以呈“++"凝集的待檢血清*稀釋度為血凝效價（血凝價）。血清的血凝價達到1：16為免疫合格。

“－"表示紅血球100％沉于孔底，完.全不凝集

“+"表示約有25％的紅血球發(fā)生凝集

“++"表示50％紅血球出現(xiàn)凝集

“+++"表示75％紅血球凝集

“++++"表示90-100％紅血球凝集

7、 注意事項

（1） 勿用90°或130°血凝板，以免誤判。

（2） 污染嚴重或溶血嚴重的血清樣品不宜檢測。

（3） 凍干血凝抗原，必須加稀釋液浸泡7－10天，方可使用，否則易發(fā)生自凝現(xiàn)象。

（4） 用過的血凝板，應及時沖洗干凈，勿用毛刷或其它硬物刷洗板孔，以免影響孔內光潔度。

（5） 使用血凝抗原時，必須充分搖勻，瓶底應無血球沉積。

（6） 液體血凝抗原4-8℃貯存，有效期4個月。

（7） 如來不及判定結果或靜置2小時結果不清晰，也可放置第二天判定。

（8） 每次檢測，只設陰性、陽性血清和稀釋液對照各1孔。

（9） 稀釋不同的試驗要素時，必須更換塑料咀。

（10） 血凝板洗凈后，自然干燥，可重復使用。